蛋白(bái)組學分析，是蛋白(bái)質分析的一(yī)項非常重要的技(jì)術(shù)，一(yī)般會(huì)使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。許多(duō)蛋白(bái)質和肽極其微量，需要質譜儀的高(gāo)靈敏度檢測才能(néng)發現，而這就(jiù)需要一(yī)個(gè)非常穩定的前端HPLC支持此微量檢測。
Prominence nano系列是一(yī)套納升LC系統，可在納升流量下(xià)進行精準流速的溶劑輸送。按照(zhào)應用不同，可以配置成1D和2D系統。
Prominence nano具備納升流速下(xià)的高(gāo)保留時間重複性，非常低(dī)的系統死體積和極低(dī)的交叉污染等特點。
基本性能(néng)
· 納升流速傳感器(qì)可保證精确的納升溶劑傳輸
· RFC系統大大降低(dī)溶劑消耗
· 低(dī)容量納升閥---保證了低(dī)的系統死體積
· 高(gāo)靈敏度分析
納米輔助控制軟件(jiàn)的直觀操作
· 圖形界面直觀操作
· 可視化監控儀器(qì)運行狀态
· 二維參數的便捷設置
蛋白(bái)質組分析的應用
· 高(gāo)保留時間重複性
· 二維LC的高(gāo)分辨率
納升流速傳感器(qì)可保證精确的納升溶劑傳輸
LC-20AD nano采用了新的RFC技(jì)術(shù),可對每一(yī)個(gè)泵進行獨立的流速控制，在納升流速下(xià)保證好的流量精度。專利的RFC系統是由高(gāo)精度的納升流速感應器(qì)控制，确保在任何時間精準的流速測量。同時，流量傳感器(qì)配置了精确的溫度控制機(jī)制，以最大程度減少不确定的環境因素對溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能(néng)保證很好的流速穩定性，在300nL/min時候保留時間重複性的RSD小(xiǎo)于0.2%。
RFC系統的原理
泵内配置了一(yī)個(gè)流速傳感器(qì)，可持續監測泵輸出的納升流速。為(wèi)了保證流速在設定的範圍内，輸液泵采用反饋控制模式，傳感器(qì)的監測到(dào)真實流速後可以自(zì)動調整分流比例，從(cóng)而保證流速的準确性。另外，分流後的流動相(xiàng)在混合前就(jiù)經過回流管路(lù)回到(dào)溶劑瓶，不會(huì)浪費(fèi)溶液。
低(dī)溶劑消耗
RFC系統可确保每個(gè)泵輸出的溶劑分流後又(yòu)回到(dào)流動相(xiàng)瓶中。就(jiù)算(suàn)在高(gāo)壓梯度分析中，兩種溶劑在分離後并不會(huì)像廢棄物(wù)一(yī)樣排出，從(cóng)而降低(dī)溶劑消耗并減少對環境的影響。
FCV納升閥，低(dī)死體積
FCV nanoFCV納升閥體積為(wèi)25nL，在納升範圍内幾乎不會(huì)展寬。在納升LC使用捕集柱進樣和二維系統中，FCV 納升閥是不可或缺的。FCV 納升閥通(tōng)過使用強化的定子和聚醚醚酮的轉子，可以大大降低(dī)樣品的吸附，同時獲得很好的耐用性。
高(gāo)靈敏度分析
SIL-20ACSIL-20AC的直接進樣功能(néng)與FCV納升閥的低(dī)擴射性能(néng)相(xiàng)結合可實現微量體積樣品的進樣分析。FCV納升閥後連接的捕集柱可以對進樣的樣品進行捕集濃縮，從(cóng)而實現高(gāo)靈敏度分析。而且，SIL-20AC被公認為(wèi)交叉污染最低(dī)的自(zì)動進樣器(qì)，這些特征都可以滿足高(gāo)靈敏度MS分析的要求。
2維LC的輔助控制軟件(jiàn)
輔助控制軟件(jiàn)可對2維LC進行便捷設置，在軟件(jiàn)圖形界面上(shàng)可輕松對2維HPLC的進行複雜(zá)梯度編程，設定流速等，然後生(shēng)成方法文件(jiàn)并下(xià)載至儀器(qì)中進行控制，而圖形化的流路(lù)圖和梯度曲線代表當前狀态。簡便的設置可避免單獨使用LC控制軟件(jiàn)帶來的一(yī)系列的操作問題。
Prominence nano 2D系統在線的結合了離子交換和反向色譜模式（如下(xià)圖所示），每種色譜模式都獨立運行，兩種模式的結合可進行最有效的分離。Prominence nano 2D系統可與配備Nano ESI源的LCMS系統聯用進行濕法蛋白(bái)組學分析，也可以與點靶儀和MALDI-TOF質譜聯用進行幹法蛋白(bái)組學分析。
易操作的一(yī)維體系
Nano-Assist一(yī)維LC設置圖1D 納升LC系統對于确認SDS PAGE分離前的蛋白(bái)質十分有效，1D系統隻需要非常簡單的操作就(jiù)可以實現。當然，輔助控制軟件(jiàn)在1D和2D系統中使用都是十分方便的。
高(gāo)保留時間重複性
蛋白(bái)質組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異，而樣本中又(yòu)存在許多(duō)特征相(xiàng)似的多(duō)肽，對保留時間的重複性要求非常高(gāo)。Prominence nano系統的高(gāo)重複性可保證蛋白(bái)質組分析的高(gāo)精數據，配置了RFC系統的LC-20AD nano可以在流速為(wèi)300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時間重複性。
牛血清白(bái)蛋白(bái)（BSA）酶解樣品的重複性
2維 LC的高(gāo)分辨率
牛血清白(bái)蛋白(bái)（BSA）酶解樣品的重複性在蛋白(bái)質組學分析時，單一(yī)的1D反相(xiàng)分離不足以提供足夠的色譜峰容量；所以，為(wèi)了實現複雜(zá)樣品的分離，需要進行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統可以進行2D分析，結合陽離子交換和反相(xiàng)模式，為(wèi)蛋白(bái)質組學分析提供所需的核心技(jì)術(shù)。下(xià)圖為(wèi)200fmol酵母蛋白(bái)質的分析圖，1D分離中的未分離組分在2D中繼續分離成幾個(gè)組分，2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。
分析條件(jiàn)
一(yī)維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動相(xiàng) | 甲酸铵緩沖液
濃度STEP梯度 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 m I.D.)
L-column （micro） |
捕集時長(cháng) | 5分鍾 |
脫鹽溶劑 | 水(shuǐ)/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時長(cháng) | 5分鍾 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.) |
流動相(xiàng) | 梯度洗脫
A)水(shuǐ)/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水(shuǐ)/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測 | LCMS-IT-TOF |
樣本 | 酵母蛋白(bái)中的蛋白(bái)
（相(xiàng)當于200 fmol的） |
* 分别利用1維和2維中不同類型的柱體進行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下(xià)，分離或檢測方法由于使用的移動相(xiàng)分離模式或類型之間的相(xiàng)互作用，可能(néng)會(huì)有一(yī)些限制。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統不僅僅可以通(tōng)過nano ESI接口連接LCMS使用，還(hái)可連接到(dào)配有自(zì)動點靶儀的MALDI-TOFMS儀器(qì)。為(wèi)了準确分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰，需要LC能(néng)夠在1nL到(dào)1µL範圍之内精确控制流速，Prominence nano系統的完全滿足了此需要。
酶解BSA樣品的UV色譜圖（500fmol）
分析條件(jiàn)
檢測器(qì) | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
(250 mmL. × 100 µm I.D.) |
流動相(xiàng) | 1、水(shuǐ)/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水(shuǐ)/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脫 |
流速 | 1 µL/min |
溫度 | 環境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點靶間隔 | 12 秒(miǎo)的點斷
每點液體：200nL（不包括基質） |